多次输血者弱抗体的产生过程及其对输血效果的影响分析
为保证输血安全和有效，输血前需要筛查患者 的不规则抗体，以使患者输注配合的血液。漏检低 效价的弱抗体会导致血液输注无效，甚至导致溶血 性输血反应［1］。本实验室遇到1 例因多次输血致产 生弱的不规则抗体的病例，报告如下。
1 材料与方法
1．1 研究对象及资料 患儿，女， 9 岁，既往无输血 史，怀疑药物导致贫血，血型鉴定为 A 型，ＲhD 阳 性。2017 年 5 月 11 日入院，15 d 内输血 12 次，输 血效果不佳。本实验室全程受医院委托进行交叉配 血，第 12 次输血前检出抗 E 抗体，回顾性检测该抗 体的产生过程，分析其对输血效果的影响。
1．2 主要试剂和仪器 筛选细胞和谱细胞购自荷 兰 Sanquin 公司，抗人球蛋白卡购自美国 Bio-Ｒad 公 司，凝聚胺、聚乙二醇( polyethylene glycol，PEG) 试 剂购自长春博德公司，酸放散试剂购自珠海贝索生 物技术公司，木瓜酶粉剂、抗 E、抗 e、抗 C、抗 c 均购 自上海血液生物医药公司，所有试剂均在有效期内 使用。KA-2200 型离心机( 日本久保田公司) ，试剂 卡孵育箱和离心机、数字显示式恒温水浴箱、可调移 液器( 美国 Bio-Ｒad 公司) 。
1．3 不规则抗体鉴定 盐水法、凝聚胺法、微柱凝 集法( microcolumn gel test，MGT) 3 种常用血型血清 学试验方法和酸放散试验均按试剂说明书操作，直 接抗人球蛋白试验采用 MGT。
1．4 PEG-MGT 在试管中加入 100 μL 患者血浆、 200 μL PEG 试剂和 50 μL 2%～5%红细胞，37 ℃温 育 15 min 后用盐水洗涤 4 次，配制成合适浓度的悬 液。由于本试验中试管抗人球蛋白法检测 PEG 处 理后的细胞凝集强度很弱，为便于判读，将处理后的 细胞配成合适浓度的悬液，加入 IgG 单抗的凝胶卡 并离心，记录凝集强度。
1．5 酶－MGT 采用 2 步酶法，将筛选细胞和谱细 胞用盐水洗涤 3 次后配成 2% ～3%浓度，加入等量 的木瓜蛋白酶，37 ℃温育 10 min 后用盐水洗涤 3 次。由于试管抗人球法检测木瓜酶处理后的红细胞 与患者血浆凝集强度太弱无法判读，将酶处理红细 胞配制成 1%浓度的低离子悬液，加入抗 IgG+C3d 的凝胶卡，再加入患者血浆，37 ℃温育后离心，记录 凝集强度。
2 结果
2．1 直接抗人球蛋白试验 见表1。第1 次输血前 患者红细胞直接抗人球蛋白试验呈 2+，第 2 次呈 1+，第 3 次和第 4 次呈 w+，第 5 次至第12 次输血前 样本直接抗人球蛋白试验全为阴性。
2．2 抗体筛查 第 1 至 4 次输血前抗筛盐水法、凝 聚胺法、MGT 均为阴性，由于此时患者直接抗人球 蛋白试验阳性，为避免自身抗体干扰未进行 PEG-MGT和酶－MGT 试验。第 5 至 8 次输血前抗筛 盐水法、凝聚胺法、MGT、PEG-MGT 和酶－MGT 均为 阴性。第 9 次输血前酶－MGT 检出不规则抗体，第 12 次输血前酶－MGT 与 PEG-MGT 均检出不规则抗 体，谱细胞格局符合抗 E 抗体( 篇幅所限未列出谱 细胞格局表) ，患者 Ｒh 分型为 CCDee。历次抗筛结 果见表 1。另外，第 1 次和第 12 次输血前抗筛盐水 法室温下为阴性， 2 次的血清 4 ℃温育 10 min 后抗筛细胞和自身对照均凝集且强度均为 3+，均含有自 身冷抗体。
2．3 抗体性质 第12 次输血前的患者血清经2-Me 处理 30 min 后，酶－MGT 法检测抗筛变为阴性，证 实抗 E 抗体为 IgM 性质。
2．4 酸放散试验 第 1 次和第 12 次输血前的患者 样本分别进行酸放散试验，第 1 次的红细胞放散液 未检出特异性抗体，第 12 次的红细胞放散液采用 酶－MGT 法检出抗 E 抗体。
2．5 抗体对输血有效性的影响 血红蛋白量随天 数变化的曲线见图 1。结合图 1 和表 1 结果发现， 从第 13 天开始检测到抗 E 抗体，第 6 天、12 天、15 天输注不含 E 抗原的血液，均使血红蛋白提高。而 第 5 天、 9 天、10 天、14 天仅输注含有 E 抗原的血 液，均未能提高血红蛋白水平。
3 讨论
盐水法、凝聚胺法、MGT、酶法是常见的不规则抗体筛查方法，凝聚胺法、MGT、酶法对于检测 Ｒh 系统的常见 IgG 类抗体，差异无统计学意义［2］; 而 IgM 类抗体通常采用盐水法筛查，部分 IgM 抗体可 由 MGT 检测到［3］。本例弱 IgM 抗 E 抗体伴随自身 冷抗体，室温盐水法阴性，4 ℃盐水法由于冷抗体无 法鉴定特异性抗体，PEG－试管抗人球蛋白法( PEGIAT) 和酶－试管抗人球蛋白法( 酶－IAT) 亦因凝集 强度太弱而不易判读。采用酶－MGT，患者直抗阴 性，37 ℃温育排除冷抗体的干扰，使用含有多种抗 人球蛋白的凝胶卡检测血浆，具有更高的灵敏度且 结果直观，为鉴定弱 IgM 型不规则抗体提供了可选 方法。为避免补体 C3 结合自身抗体的干扰，PEGMGT 使用 IgG 单抗卡，该方法在本例弱抗体检测过 程中的灵敏度不及酶－MGT。本研究中患者输注不 含相应抗原的血液，血红蛋白水平得到提升，而含有 相应抗原的血液不能提高血红蛋白水平，证明该抗 体具有临床意义。
受血者产生不规则抗体与输血次数密切相关， 当输血次数大于 6 次，不规则抗体的发生频率可达 89．7% ［4］ 。在我国最常见的不规则抗体是抗 E 抗 体［5］，本研究中患者 15 d 输血 12 次，出现输注无 效，经鉴定产生抗 E 抗体。对于多次受血者可检测 E 抗原，输注 E 同型或相容的血液，降低多次受血者 产生不规则抗体的概率，减少其输注无效和发生输 血反应的频率，从而提升输血的安全性和有效性。
参考文献略。
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