阿米卡星的鉴别检查方法
鉴别
(1)取本品约10mg,加水1ml溶解后,加0.1%蒽酮的硫酸溶液4ml,即显蓝紫色(2)取本品约10mg,加水1ml溶解后,加4%氢氧化钠溶液1ml,混合,加5%硝酸钴溶液2ml,即产生紫蓝色絮状沉淀。(3)照薄层色谱法(通则0502)试验。供试品溶液取本品适量,加水溶解制成每1ml中约含阿米卡星5mg的溶液。对照品溶液取对照品适量,加水溶解制成每1ml中约含阿米卡星5mg的溶液。系统适用性溶液取供试品溶液和对照品溶液,等量混合色谱条件见卡那霉素检查项下测定法吸取上述3种溶液各5l,分别点于同一薄层板上,展开,晾干,喷以0.2%茚三酮的水饱和正丁醇溶液,在100℃加热数分钟。系统适用性要求系统适用性溶液应显单一斑点。结果判断供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液所显主斑点的位置和颜色相同。(4)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。以上(3)、(4)两项可选做一项
检查
碱度取本品0.10g,加水10ml溶解后,依法测定(通则0631),pH值应为9.5~11.5溶液的澄清度与颜色取本品5份,各0.60g,分别加0.5mol/L硫酸溶液5ml使溶解,溶液应澄清无色;如显浑浊,与1号浊度标准液(通则0902第一法)比较,均不得更浓;如显色,与黄色或黄绿色2号标准比色液(通则0901第一法)比较,均不得更深有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品适量,加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含5.0mg的溶液。对照溶液精密量取供试品溶液适量,用流动相A定量稀释制成每1ml中约含50g的溶液。系统适用性溶液取阿米卡星对照品适量,加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含5.0mg的溶液。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂( Spurs柱,4,6mm×250mm,5μm或效能相当的色谱柱);取辛烷磺酸钠1.8g和无水硫酸钠20.0g,加pH3.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液(o.2mol/L磷酸二氢钾溶液,用0.2mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0)50ml和水900ml溶解,加乙腈50ml,混匀,作为流动相A;取辛烷磺酸钠1.8g和无水硫酸钠20.0g,加pH3.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液50ml和水850ml溶解,加乙腈100ml,混匀,作为流动相B,流速为每分钟1.3ml;按下表进行线性梯度洗脱;柱温为40℃;检测波长为200nm;进样体积10pl。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)10100系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,阿米卡星峰的保留时间应在20~30分钟之间(必要时适当调整流动相A和流动相B的比例),阿米卡星峰与杂质B峰(相对保留时间约为0.92)之间的分离度应符合要求。测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,杂质F(相对保留时间约为0.89)、杂质A(相对保留时间约为1.60,必要时用杂质A对照品确认)和杂质H(相对保留时间约为2.44)均不得大于对照溶液的主峰面积(1.0%),杂质B和杂质E(相对保留时间约为1.41)均不得大于对照溶液主峰面积的0倍(0.5%),其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(1.0%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%)卡那霉素照薄层色谱法(通则0502)试验。供试品溶液取本品,精密称定,加水溶解并定量稀释制 成每1ml中约含25mg的溶液。对照品溶液取卡那霉素对照品适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.25mg的溶液。系统适用性溶液取阿米卡星与卡那霉素对照品各适量,加水溶解并稀释制成每1ml中分别约含阿米卡星25mg和卡那霉素0.75mg的溶液。色谱条件采用硅胶G薄层板,以二氯甲烷甲醇浓氨溶液(25:40:30)为展开剂测定法吸取上述3种溶液各5,分别点于同一薄层板上,展开,晾干,喷以0.2%茚三酮的水饱和正丁醇溶液,在100℃加热数分钟。系统适用性要求系统适用性溶液中阿米卡星与卡那霉素斑点应完全分离。限度供试品溶液如显卡那霉素斑点,与对照品溶液的主斑点比较,不得更深(1%)残留溶剂照残留溶剂测定法(通则0861第一法)测定供试品溶液取本品约0.2g,精密称定,置顶空瓶中,精密加入水5m1使溶解,密封。对照品溶液取甲醇、乙醇、丙酮与乙腈各适量,精密称定,用水定量稀释制成每1ml中约含甲醇0.12mg、乙醇0.2ng、丙酮0.2mg与乙腈0.0l6mg的混合溶液,精密量取5ml,置顶空瓶中,密封。色谱条件以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或极性相近)为固定液的毛细管柱为色谱柱;柱温为40℃;进样口温度为140℃;检测器温度为250℃;顶空瓶平衡温度为80℃,平衡时间为30分钟系统适用性要求对照品溶液色谱图中,各主峰之间的分离度均应符合要求。测定法取供试品溶液与对照品溶液分别顶空进样,记录色谱图。限度按外标法以峰面积计算,甲醇、乙醇、丙酮与乙腈的残留量均应符合规定干燥失重取本品,在120℃千燥至恒重,减失重量不得过7.0%(通则0831)炽灼残渣不得过0.5%(通则0841)细菌内毒素取本品,依法检查(通则1143),每1mg阿米卡星中含内毒素的量应小于0.33EU。(供注射用)
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